基因擴(kuò)增儀的基因組DNA的提取及擴(kuò)增技術(shù)
發(fā)布時(shí)間：2014-08-28 閱讀：777次
摘要：基因擴(kuò)增儀的基因組DNA的提取及擴(kuò)增技術(shù)，下面小編給詳細(xì)介紹。
、基因擴(kuò)增儀的基因組DNA的提取
1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/div>
基因組DNA的制備是基因分析的前提。 本實(shí)驗(yàn)要求掌握基因組DNA提取的基本方法。實(shí)驗(yàn)原理 DNA在生物體內(nèi)是與蛋白質(zhì)形成復(fù)合物的形式存在的。核酸與蛋白質(zhì)之間的結(jié)合力包括離子鍵、氫鍵、范德華力等，破壞或降低這些結(jié)合力就可把核酸與蛋白分開。 DNA、RNA所含有的嘌呤環(huán)和嘧啶環(huán)的共軛雙鍵具有吸收紫外光的性質(zhì)，吸收高峰在260nm處，所以，可用紫外分光光度法測(cè)定DNA的濃度。
2.基因組DNA提取試劑盒：
在高鹽的狀態(tài)下，DNA純化樹脂專一性地吸附DNA；而在低鹽或水溶液狀態(tài)下，DNA被洗脫下來(lái)。
第二、基因擴(kuò)增儀PCR擴(kuò)增技術(shù)
1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/div>
本實(shí)驗(yàn)以所提出的全血基因組DNA為模板，以線粒體基因上一段核苷酸為引物，擴(kuò)增出924bp的擴(kuò)增產(chǎn)物。學(xué)習(xí)并掌握PCR反應(yīng)的基本原理與實(shí)驗(yàn)技術(shù)。實(shí)驗(yàn)原理 多聚酶鏈反應(yīng)技術(shù)的原理類似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程。
2.可簡(jiǎn)述為： 在微量離心管中加入適量緩沖液，加入微量模板DNA，四種脫氧核苷酸，和耐熱Taq聚合酶及兩個(gè)合成的DNA引物，并有Mg2+存在。 加熱使模板DNA在高溫下變性，雙鏈解鏈，這是所謂變性階段。 降低溶液溫度，使合成引物在低溫與模板DNA互補(bǔ)退火形成部分雙鏈，這是所謂退火階段。 溶液反應(yīng)溫度升至中溫，在Taq酶作用下，以四種dNTP為原料，引物為復(fù)制起點(diǎn)，模板DNA的一條雙鏈在解鏈和退火之后延伸為兩條雙鏈，這是延伸階段。
第三、基因擴(kuò)增儀如何正確維護(hù)保養(yǎng)
1.PCR儀基因擴(kuò)增儀需要定期檢測(cè)，視制冷方式而定一般半年至少一次。
2.PCR反應(yīng)的要求溫度與實(shí)際分布的反應(yīng)溫度是不一致的，當(dāng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)各孔平均溫度差偏離設(shè)置溫度大于1—2℃時(shí)，可以運(yùn)用溫度修正法糾正PCR實(shí)際反應(yīng)溫度差。
3.當(dāng)然PCR反應(yīng)過(guò)程的關(guān)鍵是升、降溫過(guò)程的時(shí)間控制，要求越短越好，當(dāng)PCR儀的降溫過(guò)程超過(guò)60s，就應(yīng)該檢查儀器的制冷系統(tǒng)，對(duì)風(fēng)冷制冷的PCR儀要較徹底地清理反應(yīng)底座的灰塵；對(duì)其他制冷系統(tǒng)應(yīng)檢查相關(guān)的制冷部件。
